液相色譜儀是藥物分析工作者最常用的“一門(mén)武器”。從業(yè)者深感何時(shí)能將液相做到有“打dota”感覺(jué)時(shí)，便是到了游刃有余、駕輕就熟的境界?，F(xiàn)今的液相軟件均已具備了強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理功能，如能庖丁解牛般使用，便可將此測(cè)定做到事半功倍、輕松自如。

　　一、 水相中的溶質(zhì)溶解方式

　　水相中需溶解的無(wú)機(jī)鹽和表面活性劑等固體溶質(zhì)，強(qiáng)烈建議采用加熱法，不建議采用振搖、超聲等方式。因此種方式的溶解，溶質(zhì)可能處于“臨界膠團(tuán)濃度”，其后一旦遇到某特殊情形(如遇有機(jī)溶劑、溫度劇降等)，極易析出少量結(jié)晶;而一旦析出，便將損傷儀器和色譜柱，呈現(xiàn)泵頭處析出“鹽和白粉”的現(xiàn)象。

　　二、 流動(dòng)相的配制與使用

　　1. 恒度洗脫

　　一定是將水相與有機(jī)相混合后、抽濾(使用混合型過(guò)濾膜)，用一個(gè)管路(如A管)泵入儀器，這是使用的一個(gè)原則性問(wèn)題!切勿因節(jié)約有機(jī)相、便于摸索色譜條件等原因而使用兩個(gè)管路(一個(gè)純水相、一個(gè)純有機(jī)相)抽入儀器，即便配制了脫氣機(jī)。因此種情形極易造成水相中的鹽和表面活性劑少量析出。

　　剩余流動(dòng)相完全可繼續(xù)使用，密封后放置陰涼處;待下次試驗(yàn)時(shí)與新配制的流動(dòng)相混合后抽濾即可。無(wú)需擔(dān)心發(fā)霉、無(wú)機(jī)鹽析出、揮發(fā)、比例不準(zhǔn)等問(wèn)題，這些皆為疑神疑鬼。實(shí)踐是檢驗(yàn)真理的唯一標(biāo)準(zhǔn)!實(shí)踐吧~

　　2. 梯度洗脫

　　流動(dòng)相配制最為科學(xué)的方式是：A相為高比例的水相-低比例的有機(jī)相、B相為低比例的水相-高比例的有機(jī)相(英國(guó)藥典幾乎均如此);其次為：A相為高比例的水相-低比例的有機(jī)相、B相為純有機(jī)相;最不科學(xué)的為：A相為純水相、B相為純有機(jī)相，如既有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用了此種方式，強(qiáng)烈建議改為第二種或第一種方式，否則基線漂移嚴(yán)重，難以進(jìn)行穩(wěn)定的雜質(zhì)檢測(cè)。

　　梯度洗脫結(jié)束后，強(qiáng)烈建議經(jīng)5分鐘回到初始狀態(tài)，再平衡5分鐘后開(kāi)始下一針測(cè)定。這10分鐘的穩(wěn)定極為關(guān)鍵。切勿短時(shí)間內(nèi)回到初始狀態(tài)，此舉對(duì)儀器損傷較大。

　　三、 色譜柱的安裝

　　標(biāo)準(zhǔn)SOP應(yīng)為：取A管路放入流動(dòng)相瓶中→擰松泵頭→流速由0ml/min逐級(jí)升至10ml/min，觀察尾液是否呈瀑布狀流出，持續(xù)10秒→擰緊泵頭→流動(dòng)相呈拋射狀從安裝色譜柱的一端噴出，觀測(cè)是否呈拋物線狀，持續(xù)5秒→流速逐級(jí)降至1.0ml/min →安裝色譜柱，待20秒后，流動(dòng)相從色譜柱另一端呈泉水狀涌出，安裝另一頭→手握兩端，擰緊。

　　以上安裝順序遵循的是：逐級(jí)排放氣泡和儀器內(nèi)存留的洗液，使得安裝后氣泡極難混入。本人曾試驗(yàn)梯度洗脫連續(xù)一周，第一針與最后一針主成分保留時(shí)間相差在6秒以內(nèi)。

　　四、 試驗(yàn)后色譜柱的清洗

　　1. 最為常用的C8柱、C18柱

　　1.1 流動(dòng)相僅為乙腈-水或甲醇-水時(shí)

　　繼續(xù)沖洗30分鐘，流速1.0ml/min，柱溫保持試驗(yàn)時(shí)溫度，即可。

　　1.2 水相中有無(wú)機(jī)鹽、表面活性劑或三乙胺、高氯酸等物質(zhì)時(shí)

　　先采用純水(或含有2%甲醇)，沖洗A管路(試驗(yàn)采用哪個(gè)管路，就要從頭到尾沖洗該管路)，時(shí)間30分鐘(如流動(dòng)相中有表面活性劑，適當(dāng)增加時(shí)間)，流速1.0ml/min，柱溫可較試驗(yàn)溫度高出5~10℃;隨后更換成20%甲醇再?zèng)_洗30分鐘，流速1.0ml/min，柱溫箱加熱裝置關(guān)閉。結(jié)束后取下色譜柱放置陰涼處。

　　很多同仁其后采用高比例的甲醇沖洗，實(shí)屬畫(huà)蛇添足，導(dǎo)致殘余的有機(jī)相中水相遇到高比例的甲醇后析出少量鹽和表面活性劑，從而在泵頭上、色譜柱中析出，也導(dǎo)致了色譜柱壽命大為縮短。本人曾使用過(guò)一根約2000元的色譜柱，正著用了四年、倒著用了兩年(倒著用測(cè)非有關(guān)物質(zhì))。

　　2. 其他類型色譜柱

　　查詢獲取如何科學(xué)合理地使用與清洗保存該類型色譜柱的方法，切勿盲動(dòng)，否則導(dǎo)致色譜柱性能急劇下降。

　　五、 試驗(yàn)順序

　　工作流程應(yīng)如下進(jìn)行：

　　(1) 0~2小時(shí) 配制流動(dòng)相、對(duì)照品和供試品溶液等，切勿催促昨日試驗(yàn)同事。

　　(2) 2~3小時(shí) 采用A管路注入流動(dòng)相(B、C、D管路從來(lái)不用，除非梯度洗脫才用到B管路)，平衡1小時(shí)。如流動(dòng)相中有表面活性劑，建議前一晚小流速過(guò)夜，第二天上班后將流速增至1.0ml/min，平衡1小時(shí)后即可開(kāi)始做試驗(yàn)。

　　(3) 3~5小時(shí) 測(cè)定空白溶劑，一定要做到基線不漂移后方可開(kāi)始測(cè)定。所謂“不漂移”，通常系指以1.0%自身對(duì)照溶液主成分峰高約20%高度來(lái)設(shè)定的視野范圍觀察所得，切不可設(shè)定得過(guò)小，使得雜質(zhì)峰顯得很突兀、基線抖動(dòng)得很厲害，弄得人很擔(dān)心。

　　(4) 5~8小時(shí) 配制完所有樣品，預(yù)試了對(duì)照溶液和供試品溶液，設(shè)定好自動(dòng)進(jìn)樣程序，程序最后一針設(shè)定為小流速過(guò)夜，紫外燈關(guān)閉。切勿設(shè)定為切換成B管路洗脫，此舉得不償失!

　　(5) 8~24小時(shí) 放心回家，讓儀器自動(dòng)進(jìn)樣，除非不穩(wěn)定的樣品(配制一份測(cè)定一針)。充分利用下班后的16小時(shí)，做到從容不迫、鎮(zhèn)定自若。如單位還無(wú)自動(dòng)進(jìn)樣裝置，強(qiáng)烈建議向領(lǐng)導(dǎo)申請(qǐng)購(gòu)買(mǎi)，因一臺(tái)自動(dòng)媲美三臺(tái)手動(dòng)。

　　(6) 第二天0~0.5小時(shí) 檢查并計(jì)算昨晚試驗(yàn)結(jié)果，如發(fā)現(xiàn)不良記錄，將流速增至1.0ml/min，平衡30分鐘后，測(cè)定重新配制的該份樣品即可(同時(shí)回校對(duì)照一針)。無(wú)需全部重新測(cè)定，不要過(guò)度謹(jǐn)小慎微。

　　(7) 第二天0.5~2.0小時(shí) 如上沖洗色譜柱，交給其后試驗(yàn)同事。

　　六、 液相軟件的使用

　　現(xiàn)今幾大主流品牌的硬件性能已相差無(wú)幾，主要還是軟件的設(shè)計(jì)是否能使操作者得心應(yīng)手、隨心所欲。

　　強(qiáng)烈建議掌握各軟件的批處理、編輯樣品處理模板等功能，做到一勞永逸，讓軟件充分為工作所用。“磨刀不誤砍柴工”：本人曾用20分鐘完成500個(gè)溶出度樣品數(shù)據(jù)處理，做出溶出曲線圖。體會(huì)一下~

　　七、 其他

　　1. 如需使用正相系統(tǒng)，一定要單獨(dú)采用一臺(tái)儀器(如二手的、較為破舊的、淘汰的等)，切勿采用異丙醇轉(zhuǎn)換，此舉對(duì)儀器損傷極大，等于“自殺”!

　　2. 正相所使用的流動(dòng)相(如正己烷、環(huán)己烷等)，無(wú)需抽濾，混勻超聲后即可使用，“大道至簡(jiǎn)”。

　　3. 柱溫箱必須配制。如欲經(jīng)濟(jì)，可購(gòu)買(mǎi)國(guó)產(chǎn)柱溫箱。